色譜儀分離度又稱分辨率，用來表征兩個相鄰色譜峰的分離程度，用R表示。R等于相鄰色譜峰保留時間之差與兩色譜峰峰寬均值之比。計算公式為：

    R越大，表明相鄰兩組分分離越好。一般說當(dāng)R＜1時，兩峰有部分重疊；當(dāng)R=1.0時，分離度可達(dá)98%；當(dāng)R=1.5時，分離度可達(dá)99.7%。通常用R=1.5作為相鄰兩組分已*分離的標(biāo)志。當(dāng)R＝1時，稱為4σ分離，兩峰基本分離，裸露峰面積為95.4%，內(nèi)側(cè)峰基重疊約2%。R＝1.5時，稱為6σ分離，裸露峰面積為99.7%。R≥1.5稱為*分離。《中國藥典》規(guī)定R應(yīng)大于1.5。為了判斷分離物質(zhì)對色譜柱在色譜柱中的分離情況，常用分離度作為柱的總分離效能指標(biāo)，

從塔板理論可以推論出：

    從這里我們可以清晰地看到影響分離度R的因素只有三個，即：兩臨近組分的分配系數(shù)（容量因子）之差ΔK、平均分配系數(shù)K、柱理論塔板數(shù)n。因此分離度R與柱長L（或柱理論塔板數(shù)n）的平方根成正比，與分配系數(shù)之差ΔK成正比，與平均分配系數(shù)K成反比。分配系數(shù)與固定相的性質(zhì)、厚度及柱溫有關(guān)：①與樣品極性相似的固定相，分配系數(shù)大；②固定液液膜厚度增加，分配系數(shù)增大；③溫度降低，分配系數(shù)增加。

    因此我們僅從塔板理論來看，載氣流速并不影響分離度R的。我們知道，這并不符合我們的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)。事實(shí)上，分離度R與載氣流速是密切相關(guān)的。為什么會出現(xiàn)這個情況呢？這是因?yàn)樗謇碚摰乃膫€假設(shè)并不成立，存在偏差。為了修正這些偏差，1956年荷蘭人Van Deemter提出了速率理論。
    速率理論是對塔板理論的一個修正。范第姆特方程（Van Deemter equation）在色譜學(xué)中是綜合考慮了分離過程中引起峰展寬的物理因素、動力學(xué)因素和熱力學(xué)因素后得到的單位柱長的總峰展寬與流動相流速的關(guān)系式。
    一般來說，影響峰展寬的因素包括多路徑效應(yīng)，擴(kuò)散（縱向和橫向）與固定相和流動相間的傳質(zhì)阻力。通常用理論塔板高度來表示色譜分離過程中的峰展寬。范德姆特方程呈雙曲形函數(shù)的形式，表明流動相的流速存在一個*值，在該點(diǎn)柱效zui高。范第姆特方程zui常用的形式如下式所示，該式直觀地反映了流動相流速對于分離的影響。

式中H 為理論塔板高度，A， B，C為常數(shù)，μ表示流動相的流速。

    A項(xiàng)反映的是被分析物在填充柱中可能采取不同的路徑，因而經(jīng)過的路程也不一樣長，引起色譜峰的展寬，這就是“多路徑效應(yīng)”。在毛細(xì)管開管柱中不存在多路徑效應(yīng)，這一項(xiàng)為零。
B/μ表示的是因?yàn)樯V柱各部分存在濃差而引起的縱向擴(kuò)散帶來的峰展寬。
Cμ表示達(dá)到固定相與流動相的平衡之后由于在固定相與流動相傳質(zhì)存在著阻力引起的峰展寬。

范第姆特方程的完整形式如下：

式中：

λ 是一個與柱內(nèi)填料粒度均一性與填充狀態(tài)有關(guān)的常數(shù)；
dp 為填料的粒徑；
G、ω和R 為常數(shù)；
Dm 是被分析物在流動相中的分子擴(kuò)散系數(shù)，與載氣的性質(zhì)和柱溫有關(guān)；
dc 是毛細(xì)管的直徑；
df 是固定相的膜厚度；
Ds 是被分析物在固定相中的分子擴(kuò)散系數(shù)，與固定相的性質(zhì)有關(guān)。
 

    由以上相關(guān)理論可以推論出，色譜柱的分離度與色譜柱的長度、固定相的性質(zhì)、液膜厚度、載氣流速和性質(zhì)、柱溫均有關(guān)系。
①分離度R與柱長L的平方根成正比，因此，采用較長的色譜柱可以獲得更高的分離度，但相應(yīng)的分析時間也會延長。而且色譜柱越長壓降越大，柱過長會增大進(jìn)出口壓力比，相反會降低分離度。
②固定相的性質(zhì)與分析物越相似，分離度越高；
③從上述公式中可以看出，液膜厚度的增加會導(dǎo)致塔板高度的增加，柱理論塔板數(shù)降低，同時還會增加分析物在固定相中的分配系數(shù)，理應(yīng)導(dǎo)致分離度降低，但事實(shí)上，在分配系數(shù)增加的同時，ΔK增加更為顯著，所以液膜厚度的增加能提高分離度；
④分子質(zhì)量大的載氣（N₂、Ar）的優(yōu)點(diǎn)是擴(kuò)散作用小，缺點(diǎn)是在柱中壓降大、流速慢，即分析周期長。分子量較小的載氣（H₂、He）傳質(zhì)阻力小，有利于提高分析速度，但濃度較高的介質(zhì)易在其間形成擴(kuò)散，影響分離度，所以在實(shí)際測量中H₂、He氣體一般都用于介質(zhì)濃度較低的區(qū)域并提高其流速，減少擴(kuò)散的影響。
⑤色譜柱存在一個*載氣流速，但實(shí)際分析中為縮短分析時間，流速通常稍大于*流速。
⑥提高柱溫能提高分析物在流動相和固定相中的擴(kuò)散系數(shù)，降低傳質(zhì)阻力，加快分析速度，同時使色譜峰變窄變高，但會導(dǎo)致分離度的下降。
⑦此外，色譜分離是樣品在固定相和流動相中反復(fù)分配的過程，過載后本來該進(jìn)入固定相的樣品在固定相上得不到保留（例如：本來在這點(diǎn)有50%的樣品能保留在固定相上，現(xiàn)在只能保留30%，因?yàn)楣潭ㄏ嗌蠘悠凤柡土耍捅涣鲃酉嗤浦白?，因此造成了保留變化（主要是分配系?shù)發(fā)生了改變），因此進(jìn)樣量與分離度也是有關(guān)系的。
因此，引起分離度降低的原因可能有：a.載氣流速設(shè)置不當(dāng)；b.柱溫設(shè)置不當(dāng)；c.色譜柱受到污染，柱效下降；d.進(jìn)樣量太大；e.樣品的濃度發(fā)生改變。
 

色譜儀分離度下降如何解決
①載氣流速設(shè)置不合理，可以通過降低載氣流速來提高分離度；
②柱溫設(shè)置不當(dāng)，降低柱溫，或改用程序升溫；
③色譜柱受污染，應(yīng)清洗柱子；
④減少進(jìn)樣量，提高進(jìn)樣技術(shù)；
⑤提高氣化室溫度；
⑥減少系統(tǒng)的死體積，主要是色譜柱要連接到位，毛細(xì)管色譜柱要分流，選擇合適的分流比。